Amunina

O CRF foi inicialmente isolado e purificado do hipotálamo de ovelhas pela Vale e outros cientistas em 1981. Sua sequência de aminoácidos é:
H-Ser-Gln-Glu-Pro-Pro-Ile-Ser-Leu-Asp-Leu-Thr{{ 11}}Phe-His-Leu-Leu-Arg-Glu-Val-Leu-Glu-Met{{21 }}Thr-Lys-Ala-Asp-Gln-Leu-Ala-Gln-Gln-Ala- His-Ser-Asn-Arg-Lys-Leu-Leu-Asp-Ile-Ala-NH2
Esta sequência contém 41 aminoácidos com peso molecular de aproximadamente 4,7 kDa, com serina (Ser) no terminal N- e modificação de amidação de alanina (Ala) no terminal C-. A homologia de aminoácidos entre o CRF de ovelha e o CRF humano é de 95%, com apenas diferenças nas posições 7, 10, 13, 16, 21, 23, 26, 28, 31, 34 e 38, mas as funções são altamente conservadas.

CRF (Ovino) Trifluoroacetato (número CAS: 79804-71-0) é um composto salino formado pela combinação da extremidade carboxila do CRF com ácido trifluoroacético (TFA). As vantagens da modificação do TFA incluem:

Solubilidade aprimorada: O grupo ácido forte (- COCF ∝) do TFA pode aumentar a solubilidade dos peptídeos em solventes orgânicos, facilitando as operações experimentais.
Estrutura estável do peptídeo: o TFA reduz a agregação e a degradação do peptídeo formando pontes salinas, prolongando a meia-vida.
Manter a atividade biológica: O CRF modificado ainda pode se ligar eficientemente ao receptor CRF (CRFR), mantendo as características funcionais das moléculas naturais.

O trifluoroacetato CRF (ovino) é geralmente preparado por síntese de peptídeos em fase sólida-(SPPS), onde as cadeias laterais de aminoácidos são protegidas por grupos protetores Fmoc ou Boc, gradualmente acopladas para formar uma cadeia polipeptídica linear e, finalmente, cortadas por resina TFA e purificada. Os padrões de controle de qualidade incluem:

Pureza: A cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) detecta uma pureza maior ou igual a 98%.
Verificação do peso molecular: A espectrometria de massa (MS) confirma que o peso molecular é consistente com o valor teórico.
Ensaio de atividade biológica: Verifique sua capacidade de estimular a secreção do hormônio adrenocorticotrófico (ACTH) por meio de experimentos com células in vitro (como células tumorais hipofisárias AtT-20).

O receptor CRF pertence à família de receptores acoplados à proteína G (GPCR) classe B-, que inclui dois subtipos: CRF ₁ R e CRF ₂ R
CRF ₁ R: Amplamente distribuído no sistema nervoso central (como córtex cerebral, hipocampo, amígdala) e tecidos periféricos (como glândula pituitária, glândula adrenal, placenta).
CRF ₂ R: expresso principalmente no núcleo paraventricular do hipotálamo, locus coeruleus, medula espinhal e tecidos periféricos, como coração, vasos sanguíneos e trato gastrointestinal.
A homologia das sequências de aminoácidos entre os dois receptores chega a 70%, mas há diferenças na especificidade de ligação do ligante: CRF ₁ R tem maior afinidade pelo CRF do que CRF ₂ R, que tende a se ligar aos ligantes da família Urocortin (UCN).

Após a ligação ao receptor, o CRF promove a atividade da adenilato ciclase (AC) ativando a proteína G, levando a um aumento nos níveis intracelulares de adenosina monofosfato (cAMP), que por sua vez ativa a proteína quinase A (PKA) e moléculas de sinalização a jusante, como CREB. Além disso, o CRF pode ativar a fosfolipase C (PLC) através da proteína G q, desencadeando a mobilização do íon cálcio (Ca ² ⁺) e a ativação da proteína quinase C (PKC).
Os principais nós de sinal são
Via CAMP PKA: regula a secreção de ACTH, o metabolismo da glicose e a expressão gênica.
Via Ca ² ⁺ - PKC: envolvida na regulação da excitabilidade neuronal e na plasticidade sináptica.
Via MAPK: medeia respostas adaptativas de longo prazo (como sobrevivência neuronal) por meio da fosforilação de ERK1/2.

A exposição prolongada ao CRF pode levar à dessensibilização do receptor, manifestada como diminuição da eficiência do acoplamento da proteína G e da fosforilação do receptor. A dessensibilização do CRF ₁ R depende principalmente da endocitose mediada pela arrestina -, enquanto a eficiência da endocitose do CRF ₂ R é relativamente baixa, o que pode estar relacionado a diferenças na localização subcelular do receptor. Após a endocitose, os receptores podem ser reciclados para a membrana celular ou entrar nos lisossomas para degradação, o que é crucial para manter a homeostase funcional do receptor.